Cómo extraer bacterias del ácido láctico del agua de kimchi
En la solución de liberación, vierta 1 ml en un plato plano, luego vierta en el medio de cultivo y mezcle. Después de que el medio de cultivo se haya solidificado, inviértalo a una temperatura constante de 30 ~ C.
Cultivo durante 48 horas. Elija un solo hongo que crezca bien y divídalo en líneas puras hasta que se purifique (los hongos son del mismo tamaño y las bacterias son las mismas después de la microscopía de tinción de Gram). Como resultado, se aislaron tres cepas diferentes, numeradas como cepa 1, cepa 2 y cepa 3 respectivamente. Luego transfiéralo por separado
y guárdelo en la pendiente del tubo de ensayo.
Medio de separación: 5g de extracto de carne, 10g de peptona, 5g de cloruro sódico, 1000 mL de agua destilada, 20g de agar, pH 7,0-7,2.
; Medio inclinado para conservación: 1% extracto de levadura, 2% carbonato cálcico, 1% glucosa, 2% agar, pH 7,0.
Condiciones de cultivo
Las cepas aisladas 1, 2 y 3 se inocularon en cuatro medios diferentes.
A los 30 años. =Observar y confirmar los resultados del cultivo después de 48 horas de temperatura constante.
El método de determinación adopta el método de dilución por pasos para contar el número total de colonias. El valor del pH se midió con un acidímetro pHS-2C. Caracterización del ácido láctico
La determinación del contenido se basa en la tecnología de inspección de alimentos.
1i.2.1 Procedimientos experimentales para el aislamiento y detección de lactobacilos; el jugo de chucrut fermentado naturalmente se diluye, se cultiva, se tiñe con colonias individuales y se examina bajo un microscopio.
Seleccione una sola colonia de cocos Gram positivos - medio de cultivo No. 3 - seleccione cocos con grandes zonas calcáreas y purifique y cribe repetidamente colonias individuales en medio de cultivo No. 3 varias veces.
Conservar las cepas a bajas temperaturas haciendo agujeros en los tubos de ensayo.
1.2 1.2 Identificación de bacterias ácido lácticas Las características morfológicas de las bacterias ácido lácticas se identificaron a través de un microscopio óptico y una lupa. Identificación de características fisiológicas y bioquímicas: producción de leche
Prueba ácida cualitativa-cromatografía en papel de ácido láctico 0-, ¿reacción de catalasa (enzima de contacto)? Reacción de hidrólisis de gelatina, reacción de sulfuro de hidrógeno, bacterias del ácido láctico
Prueba de nutrición de fermentación 0. Prueba de resistencia a la sal, resistencia a los ácidos y resistencia a la temperatura.
1.2.I.3 ¿Preservación de las bacterias lácticas? Utilice métodos regulares de trasplante y conservación a baja temperatura. Fórmula del medio: glucosa 1%, peptona 0,2%, L2PQ | 0,2%, agar 20%, pH 7,0, dividido en tubos de ensayo, 121. Esterilizar durante 30 minutos. Fase de crecimiento logarítmico tardío. Las células se utilizarán para la punción. >
Cultivo, luego sellado y conservación en nevera (unos 5qc), y trasplante una vez cada 2 meses
1.2.2 Características fisiológicas de los lactobacilos aislados
1.22. 1 La determinación del valor de DO de la temperatura óptima de crecimiento se compara con el medio no inoculado a la misma temperatura. El medio inoculado se extrae regularmente para la medición espectrofotométrica a 721.
Se utiliza una longitud de onda de luz de absorción = 6001RIifl. para medición
1.2.2.2 Determinación del valor de DO del ciclo de crecimiento (el método es el mismo que el anterior). Valor de pH: medidor de pH PHB-4; ácido titulable (medido como ácido láctico): absorber 1 ml de bacterias <. /p>
Agregar 9ⅱ1L de agua destilada, agregar 1 a 2 gotas de fenolftaleína y valorar con NaOH 0.1N
1.22.3 Prueba del valor óptimo de pH y concentración óptima de sal p>
Muestras utilizadas para el aislamiento: jugo de pepinillos, yogur y tomates, todos disponibles comercialmente.
Medio de cultivo de aislamiento: ①Medio de cultivo BCP: 2,5 g de extracto de levadura, 5 g de peptona , 5 g de glucosa, 0,04 g de bromocresol púrpura, 15 g de agar, 1000 ml de agua del tanque de vapor, pH 70; ② Consulte la literatura sobre el medio de cultivo MRS
Medio de conservación de bacterias: Medio de leche desnatada: centrifugue la leche fresca para eliminar las bacterias. capa superior de grasa láctea y divida la capa inferior de leche en tubos de ensayo a 105°C para su esterilización durante 20 minutos.
Identificación de trifluorobacterias, consulte la Referencia 6.
1 2 Métodos
Aislamiento y purificación de Lactobacillus 1 2 1 Diluya el jugo de pepinillo, el yogur y el líquido de lavado de la superficie del tomate en gradientes y luego viértalos en frascos y cubra con película.
Método: Las cepas se aislaron en placas de cultivo BCP y MRS mediante el método de rayado. Seleccione colonias con fines transparentes en la placa BCP
Las colonias con anillos solubles en calcio en la placa MRS se purifican repetidamente hasta obtener especies puras y las bacterias se recogen y almacenan en tubos de ensayo con leche desnatada.
1.22 Vuelva a seleccionar las bacterias del ácido láctico; realice tinción de Gram en las cepas inicialmente analizadas para retener las cepas Gram positivas y mejorar la capacidad de producción de ácido láctico.
Llevar a cabo análisis cualitativos y cuantitativos, seleccionar y conservar cepas con alta producción de ácido, y luego fermentar jugo de rábano para cepas con alta producción de ácido para seleccionar y producir aún más L puro con alto contenido de ácido Preservación e identificación de cepas de sabor
1 2 3 Determinación cualitativa de ácido láctico mediante cromatografía en papel. El sistema disolvente es etanol: amoniaco concentrado: agua = 80:5:15, y el revelador de color es 0,04%.
Solución de alcohol morado de bromocresol. Durante la cromatografía, mezcle ácido láctico y ácido cítrico en una solución estándar al 1%, dos soluciones estándar y caldo de fermentación de ácido láctico.
Muestreo uniforme 3. Cromatografía ascendente, desarrollo de color y comparación de muestras estándar.
El ácido láctico (1.24) se determinó cuantitativamente mediante cromatografía de gases y los derivados del ácido láctico se prepararon mediante esterificación bencilica.
Cultivar en medio ácido a 37°C durante 3 días y centrifugar. Se raspó el sobrenadante para preparar derivados y se analizó el contenido mediante cromatografía de gases. Las condiciones de trabajo de la cromatografía de gases son las siguientes:
Columna EGS, temperatura de la columna 160'C, temperatura de vaporización 180'17. , temperatura del detector l70 ℃, gas portador nitrógeno.
La identificación de 1,25 cepas se basó en la "Octava edición concisa del Manual de identificación bacteriana de Bergey" y el "Manual de identificación bacteriana común" [6 pares de recribado
La morfología, Se identificaron sistemáticamente la fisiología y bioquímica de la cepa, la utilización de la fuente de carbono y otros aspectos, y se extrajo el ADN de la cepa de bacterias del ácido láctico, utilizando la temperatura de fusión Farba g+c% contenido j.
Eso es básicamente todo.