Principios de la tecnología PCR digital
1. Esta tecnología se basa en la síntesis enzimática de ADN polimerasa en presencia de ADN molde, cebadores y cuatro desoxinucleótidos. La ADN polimerasa utiliza ADN monocatenario como plantilla y comienza su síntesis con la ayuda de un tramo corto de ADN bicatenario. Uno o dos cebadores oligonucleotídicos sintéticos se combinan con secuencias complementarias en una plantilla de ADN monocatenario para formar una doble cadena parcial.
2. Bajo la temperatura y el ambiente adecuados, ¿la ADN polimerasa agrega desoximononucleótido al cebador 3? -Oh fin, ¿y a partir de ahí, por la plantilla 5? →Extenderse en la dirección 3? para sintetizar una nueva hebra complementaria de ADN.
Introducción a la tecnología PCR
La primera aplicación clínica de 1 y la tecnología PCR comenzó con la detección de mutaciones genéticas en células falciformes y β-talasemia. El área de aplicación más valiosa de la PCR en la ciencia de laboratorio médico es el diagnóstico de enfermedades infecciosas. En teoría, siempre que haya un patógeno en la muestra, la PCR puede detectarlo.
2. La tecnología de PCR no solo puede detectar eficazmente mutaciones genéticas, sino también detectar con precisión la expresión de oncogenes y puede utilizarse para el diagnóstico temprano, la clasificación, la estadificación y el pronóstico de tumores.
3. La cantidad de productos de PCR aumenta exponencialmente y la plantilla inicial que se va a probar se puede amplificar en el nivel de picogramos (pg=10-12) hasta el nivel de μg=-6. Se puede detectar una célula objetivo entre 6,5438 millones de células; en la detección de virus, la sensibilidad de la PCR puede alcanzar 3 RFU, la tasa de detección más baja es de 3 bacterias;
4. La unión de los cebadores a las plantillas y la extensión de las cadenas de los cebadores siguen el principio de emparejamiento de bases. La fidelidad de la reacción de síntesis de la polimerasa y la resistencia a altas temperaturas de la TaqDNA polimerasa permiten que la unión de plantillas y cebadores se realice a temperaturas más altas. La especificidad de la unión aumenta considerablemente y el fragmento del gen diana amplificado puede mantener una alta precisión. Al seleccionar regiones genéticas objetivo con alta especificidad y conservación, la especificidad será mayor.